PRÁCTICA Nº3: PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO Y SU POSTERIOR TINCIÓN. (BACTERIAS DEL YOGOURT)

OBJETIVO:

El objetivo de esta práctica es aprender a realizar un frotis bacteriano y su posterior tinción para poder observarlo al microscopio.

FUNDAMENTO:

Un frotis bacteriano es una extensión en forma de película delgada de una suspensión de microorganismos bacterianos que se efectúa sobre una placa de vidrio transparente o portaobjetos, para su observación bajo un microscopio óptico.

En este procedimiento vamos a realizar 3 pasos claves: extensión, desecación y fijación.

• EXTENSIÓN: Colocamos una pequeña gota de agua destilada en el porta, con el asa de siembra, estéril, transferimos una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido a la gota, removemos la mezcla con el asa hasta formar una suspensión homogénea y la extendemos bien con el asa.
• DESECACIÓN: La preparación se deja secar, a tª ambiente o calentando muy suavemente.
• FIJACIÓN: Gracias a la fijación conseguimos adherir el frotis al vidrio del portaobjetos, para que la muestra no sea arrastrada con los lavados durante la tinción y hacer que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio, sin alterar la morfología ni las agrupaciones bacterianas que puede haber.

MATERIALES Y REACTIVOS.

• Asa de siembra.
• Mechero Bunsen.
• Portaobjetos.
• Muestras bacterianas de origen natural, en este caso, yogur de galleta.
• Colorantes par tinción.
• Microscopio.
• Aceite de inmersión.
  

PROCEDIMIENTO.

1. Cogemos el portaobjetos y realizamos la extensión, tomando una mínima porción de yogur con la ayuda de un asa de siembra esterilizada.

2. Una vez realizada la extensión, lo dejamos secar al aire.

3. Una vez secado, fijamos con calor pasando, tres veces, el porta sobre la llama del mechero.

4. Una vez fijado, teñimos con colorante, en nuestro caso, cristal violeta, durante 1-2 minutos. (Echamos 1-2 gotas)

Cuando pasan los 1-2 minutos, lavamos.

5. Secamos la preparación.

6. Cuando este seca, observamos al microscopio utilizando el 100x, con la ayuda de una gota de aceite de inmersión.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS/OBSERVACIONES.

A pesar de haber realizado una extensión con una gran cantidad de yogur, pudimos realizar la observación al microscopio y observarlo bien.

CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD.

• Uso del EPI correspondiente.
• Mantener el orden del área de trabajo para evitar accidentes.
• Una vez utilizada el asa de siembra, sea desechable o no, la flameamos para eliminar los microorganismos.

GESTIÓN DE RESIDUOS.

Todos los residuos generados fueron desechados en la basura.