PRÁCTICA Nº6: TINCIÓN DE GRAM.

OBJETIVO:

El objetivo de esta práctica es realizar una tinción de Gram de bacterias, concretamente nosotros hemos utilizado las del exudado faringeo.

FUNDAMENTO:

La tinción de Gram consiste en una prueba de laboratorio útil para detectar la presencia de microorganismos, especialmente bacterias y algunas veces hongos, en una muestra obtenida del foco infeccioso o sospechoso de serlo. Proporciona resultados con relativa rapidez y facilidad acerca del tipo de bacteria que puede estar presente.

MATERIALES Y REACTIVOS:

Los materiales utilizados en esta práctica han sido:

• Asa de siembra esteril.
• Portaobjetos.
• Paralelas.
• Bandeja.
• Mechero Bunsen.
• Colorantes: Cristal Violeta, Lugol, Alcohol 96º y Safranina.

PROCEDIMIENTO:

1. Cogemos el portaobjetos y realizamos la extensión, tomando la bacteria aislada que queremos observar al microscopio. Tenemos que depositar una gota de agua destilada para poder realizar la extensión.

2. Una vez realizada la extensión podemos dejarlo secar al aire o con la ayuda del mechero. Una vez seco, lo fijamos pasando el porta por el mechero 3 veces.

3.Una vez fijado, teñimos con el primer colorante, Cristal Violeta y lo dejamos actuar durante 1 minuto. Después de que pase el tiempo, lo lavamos.

 El cristal violeta hace que se tiñan las Gram+.

3. Cogemos el segundo colorante, lugol, y lo dejamos actuar durante 1 minuto, despúes lavamos.

4. Cogemos el tercer colorante, el alcohol 96º, lo dejamos actuar durante 15 segundos y lavamos. El alcohol 96º va a hacer que se vaya la tinción de las Gram - para que cuando utilicemos la safranina se tiñan.

5. Cogemos el último colorante, la safranina, la dejamos actuar durante 1 minuto y lavamos. La safranina tintará las Gram -.

6. Después de lavar el último colorante, lo dejamos secar.

7. Una vez seca, lo observamos al microscopio con el objetivo de 100x, con una gota de aceite de inmersión.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS.

CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD.

• Uso del EPI correspondiente.
• Mantener el orden del área de trabajo para evitar accidentes.
• Una vez utilizada el asa de siembra, sea desechable o no, la flameamos para eliminar los microorganismos.

GESTIÓN DE RESIDUOS.

Todos los residuos generados fueron desechados en la basura.